TRIsure

TRIsure, jest mieszaniną fenolu, izotiocyjanianu guanidyny i innych związków, które podczas etapu homogenizacji próbki, prowadzą do lizy komórek i inaktywacji RNaz i DNaz. W kolejnym etapie dodaje się chloroform, odpowiedzialny za rozdział DNA, RNA i białka.  Wirowanie w obecności chloroformu prowadzi do utworzenia się 3 faz:

• przezroczystej fazy wodnej (górnej) zawierającej RNA
• zielonej fazy organicznej (dolnej)
• interfazy zawierającej DNA i białka

RNA ekstrahuje się z fazy wodnej przez wytrącanie alkoholem izopropylowym, DNA wytrąca się z warstwy organicznej etanolem, a białka wytrąca się z supernatantu alkoholem izopropylowym.

TRIsure umożliwia niezawodną analizę transkryptomu, genomu i proteomu, ponieważ RNA, DNA i białka pochodzą z tej samej próbki i tej samej populacji komórek.

Właściwości:

• szybkość – prosty protokół do izolacji wysokiej jakości całkowitego RNA, genomowego DNA i białek w zaledwie 60 minut
• wydajność – można z cennych próbek (biopsje) izolować sekwencyjnie RNA, DNA i białko
• wygoda – zielony barwnik umożliwia łatwe określenie faz, co zwiększa dokładność pipetowania
• elastyczność – objętość odczynnika można skalować w celu efektywnej ekstrakcji małych i dużych ilości komórek i tkanek

Aplikacje:

• qPCR i RT-qPCR
• end-point PCR i RT-PCR
• Northern/Southern/Western blotting
• genotypowanie
• analiza ekspresji genów
• analiza transgeniczna
• epigenetyka
• charakterystyka linii komórkowej
• elektroforeza żelowa 2D
• spektroskopia masowa